Práctica 39: Preparación de una curva de actividad de la protrombina. (PXL)(B3)

Fecha:6-3-15

Preparación de una curva de actividad de la protrombina.

Introducción:

Los resutados de una determinación del tiempo de protrombina (TP) pueden expresarse en forma de porcentaje de actividad (Índice de Quick).

Para ello es necesario preparar, una curva de actividad de la protrombina y, posteriormente, iterpolar en la gráfica trazada el valor en segundos del TP determinado en el plasma problema.

Material:

-Un rotulador de vidrio.

-Una gradilla.

-Una pipeta graduada de 1ml.

-Una micropipeta de 100 y de 200 microlitros.

-Un coagulómetro.

-Cinco trocitos de acero para depositarlos en las cubetas del coagulómetro.

-Un baño de agua ajustable a 37ºC.

-Un bolígrafo y papel milimetrado.

-Una regla

-Tubos de ensayo de plástico.

Reactivos:

-Suero salino 0,85%.

-Tromboplastina cálcica.

-Un pool de plasmas normales o un plasma control normal.

Fundamento:

-Para construir una curva de actividad de la protrombina se prepara una bateria de diluciones, a partir de un plasma control normal, y se mide el TP del plasma control normal no diluido  de cada una de las diluciones preparadas.

-Con estos datos se traza una curva de calibrado anotando en el eje de abcisas(el eje X) los valores en segundos, del TP del plasma control no diluido y de cada una de sus diluciones(el eje Y) y, en el je de ordenadas, el % de actividad asignado a cada uno de ellos.

Procedimiento:

1. Rotular los tubos de ensayo:
-1:1
-2:2
-3:3
-4:4
-5:5

2. Introducir en cada tubo:

3. Depositar 100microlitros de cada disolución en cada cubeta de coagulómetro, señalando en cada cubeta que porcentaje hay en cada una.

4. Atemperar las cubetas y la tromboplastina cálcica a 37ºC durante 5 minutos, de mientras se puede depositar en cada cubeta un trocito de hierro.

5. Medir en el coagulómetro el tiempo de coagulación desde el comento en el que se agregan 200microlitros de tromboplastina cálcica.

Lectura de los resultados:

-Tiempo de protrombina(TP):

·Plasma 100% diluido: 5,0 segundos.

·Plasma 50% diluido: 21 segundos.

·Plasma 33% diluido: 29,3 segundos.

·Plasma 25% diluido: 41,7 segundos.

·Plasma 10% diluido: 47,6 segundos.

A partir de estos datos, podremos realizar una gráfica sabiendo la concentración(eje Y) y el tiempo(ejeX) de cada plasma control diluido.