Práctica 36: Determinación del tiempo de tromboplastina parcial activada(TTPA)(PXXXIX)(B3)

Fecha: 4-3-15

Determinación del tiempo de tromboplastina parcial activada.(TTPA)

Introducción:

El TTPA es el tiempo que tarda en coagular un plasma pobre en plaquetas PPP, tras su recalcificación y en presencia de un sustituto de f3p.

Material:

-Una gradilla.

-Un coagulómetro.

-Dos trocitos de acero para introducirlos en las cubetas de coagulómetro.

-Una micropipeta de 100microlitros.

-Un rotulador de vidrio.

-Un baño de agua ajustable a 37ºC.

-Tubos de ensayo de plástico.

Reactivos:

-Solución de cloruro cálcico 0,025%.

-Una cefalina activada con ácido elágico.

-Un pool de plasmas normales simulando un plasma control.

Muestra:

-Un plasma pobre en plaquetas (PPP).

Fundamento:

-El sustituto del f3p consiste en una suspensión de fosfolípidos, obtenida a partir de cerebros de conejos, que recibe el nombre de cefalina.

Procedimiento:

1. Rotular un tubo con la letra C de control y otro con la letra M de muestra.

2. Atemperar estos dos tubos a 37ºC, puede hacerse en el coagulómetro, y los reactivos en la mano.

3. Añadir al tubo C 100microlitros de plasma control y 100microlitros de muestra a tubo M.

4. Añadir 100microlitros a cada uno de los tubos, la cefalina activada (R1).

5. Una vez en el coagulómetro añadir 100 microlitros de cloruro cálcico (R2) a cada tubo, realizandolo uno detrás de otro.

Lectura de los resultados:

TTPA de la muestra: 116,6 segundos

TTPA del control: 28,1 segundos.

Diferencia entre TTPA de la muestra y TTPA del control: 8,1%

Cociente entre el TTPA de la muestra y TTPA del control: 4,14
Los valores normales oscilan entre 30 y 40 segundos.

Práctica 35: Determinación del test de Howell. (PXXXVIII)(B3).

Fecha: 3-3-15

Determinación del test de Howell.

Introducción:

El test de Howell es la prueba que mide el tiempo que tarda en coagularse un plasma rico en plaquetas (PRP), obtenido a partir de una muestra de sangre anticoagulada con citrato sódico, cuando se vuelve a recalcificar.

ACLARACIÓN

Para las pruebas de hemostasia primaria utilizaremos plasma rico en plaquetas: 1000rpm-10´.

Para las pruebas de coagulación utilizaremos plasma pobre en plaquetas: 3000rpm-10´.

Material:

-Un rotulador de vidrio.

-2 tubos de hemólisis de vidrio.

-1 micropipeta de 100microlitros.

-Un baño de agua ajustable a 37ºC.

-Cronómetros.

-Una gradilla.

Reactivos:

-Suero salino al 0,89%.

-Cloruro cálcico 0,025M.

-Plasma control de procedencia de un pool de plasmas normales.

Muestra:

-Plasma rico en plaquetas.

Fundamento:

-El resultado del test de Howell es el tiempo transcurrido desde la adición del CaCl2 al PRP hasta la coagulación de este, ya que el calcio actúa como un quelante de la fibrina produciendo un coágulo.

Procedimiento:

1. Rotulamos dos tubos de ensayo:

-1º: C, plasma control.

-2º: M, muestra problema.

2. Vertimos en cada tubo:

-1º C: 100microlitros de plasma control + 100microlitros de suero salino.

-2º M: 100microlitros de muestra problema + 100microlitros de suero salino.

3. Atemperar los dos tubos en el baño a 37ºC entre 5 y 15 minutos.

4. Para hacerlo más sencillo lo haremos uno a uno, es decir, en el primer tubo, C, introduciremos 100microlitros de CaCl2 y pondremos el cronómetro simultaneamente, sin sacar el tubo del baño, los inclinamos suavemente hacia delante y hacia detrás, cuando se observe enturbamiento o coágulo detenemos el tiempo y lo anotamos.

5. Realizaremos lo mismo con el segundo tubo, M, en pareja resultará más fácil, pero si se tiene que hacer individualmente es mejor así y luego calcular la diferencia de tiempo.

Lectura de los resultados:

El tiempo en coagular el plasma control: 22 segundos (raro).

El tiempo en coagular la muestra problema: 2 minutos con 15 segundos.

Los valores normales están entre 90 y 130 segundos.

Práctica 34: Tiempo de coagulación (Página 337)(Tema 33)

Fecha: 2-3-15

Pruebas que investigan la coagulación.

Tiempo de coagulación.

Introducción:

Es el tiempo que tarda en generarse un coágulo en una muestra de sangre no anticoagulada, que se pone en contacto con una superficie de vidrio.

Muestra:

Sangre venosa sin anticoagulante.

Técnica: 

Para determinar esto, se sitúa la muestra en el interior de un tubo de vidrio y se incuba a 37ºC. Siendo el tiempo de coagulación el transcurrido desde el depósito de la sangre en el tubo hasta la aparición de un coágulo en el interior del mismo.

Los valores normales se encuentran entre 5 y 10 minutos, en clase han sido 3,5 minutos, es posible a que la sangre de la bolsa este muy diluida. En cualquier caso, depende de muchos factores e tiempo de coagulación.

Este estudio permite la detección de trastornos relacionados con la vía intrínseca o con la vía común de la coagulación.

Esta prueba ya esta en desuso.