Determinación del test de Howell.
Introducción:
El test de Howell es la prueba que mide el tiempo que tarda en coagularse un plasma rico en plaquetas (PRP), obtenido a partir de una muestra de sangre anticoagulada con citrato sódico, cuando se vuelve a recalcificar.
ACLARACIÓN
Para las pruebas de hemostasia primaria utilizaremos plasma rico en plaquetas: 1000rpm-10´.
Para las pruebas de coagulación utilizaremos plasma pobre en plaquetas: 3000rpm-10´.
Material:
-Un rotulador de vidrio.
-2 tubos de hemólisis de vidrio.
-1 micropipeta de 100microlitros.
-Un baño de agua ajustable a 37ºC.
-Cronómetros.
-Una gradilla.
Reactivos:
-Suero salino al 0,89%.
-Cloruro cálcico 0,025M.
-Plasma control de procedencia de un pool de plasmas normales.
Muestra:
-Plasma rico en plaquetas.
Fundamento:
-El resultado del test de Howell es el tiempo transcurrido desde la adición del CaCl2 al PRP hasta la coagulación de este, ya que el calcio actúa como un quelante de la fibrina produciendo un coágulo.
Procedimiento:
1. Rotulamos dos tubos de ensayo:
-1º: C, plasma control.
-2º: M, muestra problema.
2. Vertimos en cada tubo:
-1º C: 100microlitros de plasma control + 100microlitros de suero salino.
-2º M: 100microlitros de muestra problema + 100microlitros de suero salino.
3. Atemperar los dos tubos en el baño a 37ºC entre 5 y 15 minutos.
4. Para hacerlo más sencillo lo haremos uno a uno, es decir, en el primer tubo, C, introduciremos 100microlitros de CaCl2 y pondremos el cronómetro simultaneamente, sin sacar el tubo del baño, los inclinamos suavemente hacia delante y hacia detrás, cuando se observe enturbamiento o coágulo detenemos el tiempo y lo anotamos.
5. Realizaremos lo mismo con el segundo tubo, M, en pareja resultará más fácil, pero si se tiene que hacer individualmente es mejor así y luego calcular la diferencia de tiempo.
Lectura de los resultados:
El tiempo en coagular el plasma control: 22 segundos (raro).
El tiempo en coagular la muestra problema: 2 minutos con 15 segundos.
Los valores normales están entre 90 y 130 segundos.
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