Determinación funcional del fibrinógeno.
Introducción:
El fibrinógeno, en presencia de un exceso de trombina, se trasnforma en fibrina. El tiempo de formación del coágulo es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno presente en la muestra de plasma.
Material:
-Una gradilla.
-Un coagulómetro.
-Tubos de ensayo de plástico.
-Una pipeta de vidrio graduada de 1ml y otra de 2ml.
-Una micropipeta capaz de dispensar 100 y 200 microlitros.
-Rotulador de vidrio.
-Cubetas de coagulómetro.
-Hierrecitos para coagulómetro.
-Un bolígrafo y papel milimetrado.
Reactivos:
-Trombina bobina (R1).
-Tampón imidazol (R2).
-Solución caolín (R3).
-Plasma control.
-Agua destilada.
Muestra:
-Plasma pobre en plaquetas.
Fundamento:
-La determinación de fibrinógeno por el tiempo de coagulación de trombina, está basada en el método descrito por Clauss. En presencia de altas concentraciones de trombina, el tiempo necesario para la formación del coágulo en el plasma diluido es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno.
Procedimiento:
1.Rotular los tubos de plástico:
-1º: MD, muestra diluida.
-2º: 1/5, dilución 1/5.
-3º: 1/10, dilución 1/10.
-4º: 1/20, dilución 1/20.
-5º: 1/30, dilución 1/30.
-6º: 1/40, dilución 1/40.
2. Preparar una dilución de la muestra 1/10 y los controles en tampón imidazol: 50microlitros de muestra + 450microlitros de tampon imidazol.
3. Preparar las siguientes diluciones del calibrados en tampón imidazol:
3. Depositar 0,2mL de cada dilución en cubetas de coagulómetro e identificarlas correctamente.
4. Añadir 20 microlitros de R3 a cada cubeta de coagulómetro y atemperar a 37ºC durante cinco minutos, también añadir un trocito de hierro a cada cubeta.
5.Importante, el R1 no se atempera.
6. Añadir 100 microlitros de R1 y medir el tiempo en el que se forma el coágulo en cada cubeta.
Lectura de los resultados:
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