Estudio de la fragilidad osmótica de los hematíes.
Introducción:
Una de las funciones de la membrana plasmática de las células es:
Una vez explicado qué es el equilibrio osmótico, entenderemos mejor el concepto de concentrado y diluido realizando esta práctica.
Material:
-Pipetas pasteur.
-Tubos de centrífuga.
-Una cetrífuga.
-Un reloj.
-Un espectrofotómetro.
-Cubetas de espectrofotómetro.
-Una gradilla.
-Tijeras y papel parafilm.
Reactivos:
-Suero fisiológico tamponado a pH fisiológico (7,4).
-Agua destilada.
Muestra:
-Sangre venosa anticoagulada con heparina.
Fundamento:
-Este estudio valora la resistencia de los eritrocitos a disoluciones de presión osmótica decreciente, en condiciones constantes de pH y temperatura. Para ello se enfrentan los hematíes problema a soluciones tamponadas de cloruro sódico cuya concentración es decreciente a partir de 9 gramos por mil.
-En condiciones normales, un eritrocito puede aceptar sin hemolizarse una entrada de agua que incremente su volumen en un 70% como máximo.
Procedimiento:
1. Preparación de suero salino tamponado:
-Como ya tenemos preparado suero fisiológico 0,9% solo le tendriamos que añadir 2,7 gramos de di-sodio hidrógeno fosfato (Na2HPO4).
2. En esta práctica trabajaremos con siete concentraciones conocidas (En realidad han sido 8 pero la absorbancia del último tubo no era la esperada). Asi que enumeramos cada tubo de centrífuga según corresponda:
En mi caso hemos seleccionado los tubos 1, 3, 7, 9, 11, 13, 15 y 17
3. Vertir una gota de sangre en cada tubo de centrífuga.
4. Reposar durante 30 minutos a temperatura ambiente.
5. Centrifugar a 2000rpm durante cinco minutos o dejar reposar durante 3 horas.
6. Medir las absorbancias de las muestras del menos diluido al más concentrado para no manchar ni desperdiciar pipetas pasteur y demás.
Lectura de los resultados:
Tubo 1: ABS= 0 (Blanco)
Tubo 3: ABS= 0,018.
Tubo 7: ABS= 0,153.
Tubo 9: ABS= 0,579.
Tubo 11: ABS= 0,983.
Tubo 13: ABS= 1,042.
Tubo 15: ABS= 1,099.
Tubo 17: ABS= 0, 976. (Esta muestra la hemos descartado, pues no debería de salir este resultado).
Calculamos el porcentaje de hemolisis:
% de hemólisis= A(Absorbancia del líquido presente en el tubo analizao)/Am(Absorbancia máxima) x 100
Tubo 3: (0,018/1,099)x100=1,64 %
Tubo 7: (0,153/1,099)x100=13,92%
Tubo 9: (0,579/1,099)x100=52,68%
Tubo 11: (0,983/1,099)x100=89,44%
Tubo 13: (1,042/1,099)x100=94,81%
Tubo 15: 100%
En condiciones normales, debe apreciarse visualmente una hemólisis parcial clara a partir del tubo nº 10 y, una hemólisis prácticamente total a nivel de los tubos 12, 13 ó 14.
Generalmente el 50% de hemólisis se produce a nivel de los tubos 10 u 11.
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