Fecha: 26-02-15
Prueba de la sacarosa.
Introducción:
La prueba e la sacarosa consiste en situar los hematíes problema en un medio de baja fuerza iónica. En este medio, los eritrocitos tienden a fijar el complemento, por lo que cuando los glóbulos rojos presentes en la muestra tienen una sensibilidad anormalmente alta al complemento, tienden a sufrir la acción de éste y a lisarse.
Material:
-Pipetas pasteur.
-Micropipetas grauadas de 100 y 200 microlitros.
-Pipetas graduadas de 2 y 5 ml.
-Tubos de centrífuga.
-Un reloj.
-Una centrífuga.
-Un espectrofotómetro.
-Una gradilla.
-Rotulador de vidrio.
-Una báscula.
-Matraz de 100ml
-Un vidrio de reloj.
-Una varilla.
-Una cucharilla de metal.
-Vasos de precipitado.
Reactivos:
-Agua destilada.
-Solución acuosa de sacarosa 9,24%.
-Sangre control (Sangre recién extraida la cual sabemos que no presenta hemólisis).
-Suero fisiológico 0,9%.
-Solución acuosa de amoniaco 1/6.
Muestra:
-Sangre venosa anticoagulada con EDTA.
Fundamento:
Con esta prueba podremos determinar si nuestra sangre problema presenta hemoglobinuria paroxistica nocturna.
Proceimiento:
1. Preparar solución acuosa de amoniaco 1/6:
-1/6=X/100; X= 16,67 g de soluto.
-100g-16,67= 83,33g de disolvente.
2. Preparar solución acuosa de sacarosa 9,24%:
-Pesar 9,24g de sacarosa y disolver en 100ml de agua destilada.
3.Rotular tres tubos:
-1º: SF; Suero fisiológico.
-2º: SC: Sangre control.
-3º: SP: Sangre problema.
4. Rellenarlos según estas indicaciones:
5. Agitar suavemente los tubos y dejar reposar a temperatura ambiente durante 30 minutos.
6. Centrifugar los tubos a 2000rpm durante 5 minutos.
7. Rotular tres tubos:
-4º: TB; Tubo blanco.
-5º: TPr; Tubo patrón.
-6º: TPa; Tubo problema.
8. Rellenarlos según la tabla:
9. Medir la absorbancia de estos tubos en el espectrofotómetro.
Lectura de los resultados:
El resultado de las absorbancias:
-TB: ABS=0 (blanco)
-TPr: ABS= -0,052
-TPa: ABS= -0,00
Estos son los resultados de una sangre que sabemos que no tiene HPN y por eso nos dan negativos.
Aun así se puede calcular el % de hemólisis:
% de hemolisis=A(absorbancia del líquido presente en el tubo problema)/Am(absorbancia del líquido contenido en el tubo patrón (A máxima) x 100
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