Práctica 33: Determinación del tiempo de hemorragia con la técnica de Duke. (PXXXVII)(B3).

Fecha: 2-3-15

Determinación del tiempo de hemorragia con la técnica de Duke.

Introducción:

El tiempo de hemorragia es el tiempo que transcurre desde la sección de un grupo de capilares hasta la formación del trombo blanco plaquetario.

Material:

-Algodón.

-Un portaobjetos (opcional).

-Guantes estériles.

-Una lanceta.

-Un trozo de papel de filtro limpio.

-Un cronómetro(opcional).

Reactivos:

-Alcohol eqtílico de 96º para desinfectar y betadine.

Fundamento:

-El tiempo de hemorragia se determina efectuando una pequeña herida en la piel y, seguidamente, midiendo el tiempo que tarda en cesar de manar sangre a través de la herida.

Procedimiento:

1. Recortar un círculo de papel de filtro y marcar los bordes con rayas simulando cinco segundos entre cada una.

2. Limpiar el lóbulo de la oreja con un algodón y dejar que se seque el desinfectante.

3. Colocar un portaobjetos detrás de la oreja o bien con la ayuda de los dedos para hacer presión a la hora de pinchar.

4. Pinchar el lóbulo de la oreja y simultaneamente poner en marcha el cronómetro o bien, contar mentalmente cinco segundos cada vez que vayamos a desplazar el papel de filtro por cada raya para recoger la sangre.

5. Parar el cronómetro  cuando se deje de teñir el papel de filtro con sangre o bien mirar en que raya (segundo) se ha dejado de teñir.

Lectura de los resultados:

-En general los resultados han sido bastante cortos, entre 10 y 45 segundos, los normal esta entre 1 y 3 minutos.

Práctica 32: Determinación de la velocidad de sedimentación globular (VSG) (PXXVI)(B3)

Fecha:2-3-15

Determinación de la velocidad de sedimentación globular (VSG)

Introducción:

La VSG consiste en la medición de la rapidez con la que se sedimentan los hematíes en una muestra. En condiciones patológicas, los eritrocitos pueden sedimentar con mayor facilidad, dando un aumenta en la VSG.

Material:

-Pipeta de vidrio graduada desechable que agregue en su interior un émbolo de aspiración de plástico.

-Una gradilla.

-Tubo con citrato sódico con tapón de goma perforable.

-Reloj.

Reactivos:

-El anticoagulante aplicado, citrato sódico al 3,8%.

Muestra:

-Sangre venosa anticoagulada con citrato sódico al 3,8%.

Fundamento:

La VSG equivale a la longitud del recorrido que desciende la columna de eritrocitos, desde la parte superior del tubo hacia abajo, en un intervalo de tiempo.

Procedimiento:

1. Mezclar la sangre problema con el anticoagulante suavemente en el tubo mezclador.

2. Depositar el tubo en una gradilla de forma que quede recto verticalmente y sin que se mueva.

3. Introducir la pipeta por la parte del émbolo de plástico en el tubo con la muestra problema hasta llegar a el algodón que contiene la pipeta en su interior.

4. Realizar la lectura a la primera hora y a la segunda.

Lectura de los resultados:

A la primera hora: 7mm

A la segunda hora: 15mm

Los valores normales son en mujeres: 1º 3-10mm y 2º 12-20mm

Los valores normales son en hombres: 1º 2-7mm y 2º 8-15mm

Podemos realizar el índice de Katz:

Índice de Katz=[VSG 1ºh+(VSG 2ºh/2)]/2

Índice de Katz= [7+(15/2)]/2= 7,25

Los valores normales del IK son entre 2 y 16.

Práctica 31: Prueba de la sacarosa. (PXXV)(B3).

Fecha: 26-02-15

Prueba de la sacarosa.

Introducción:

La prueba e la sacarosa consiste en situar los hematíes problema en un medio de baja fuerza iónica. En este medio, los eritrocitos tienden a fijar el complemento, por lo que cuando los glóbulos rojos presentes en la muestra tienen una sensibilidad anormalmente alta al complemento, tienden a sufrir la acción de éste y a lisarse.

Material:

-Pipetas pasteur.

-Micropipetas grauadas de 100 y 200 microlitros.

-Pipetas graduadas de 2 y 5 ml.

-Tubos de centrífuga.

-Un reloj.

-Una centrífuga.

-Un espectrofotómetro.

-Una gradilla.

-Rotulador de vidrio.

-Una báscula.

-Matraz de 100ml

-Un vidrio de reloj.

-Una varilla.

-Una cucharilla de metal.

-Vasos de precipitado.

Reactivos:

-Agua destilada.

-Solución acuosa de sacarosa 9,24%.

-Sangre control (Sangre recién extraida la cual sabemos que no presenta hemólisis).

-Suero fisiológico 0,9%.

-Solución acuosa de amoniaco 1/6.

Muestra:

-Sangre venosa anticoagulada con EDTA.

Fundamento:

Con esta prueba podremos determinar si nuestra sangre problema presenta hemoglobinuria paroxistica nocturna.

Proceimiento:

1. Preparar solución acuosa de amoniaco 1/6:

-1/6=X/100; X= 16,67 g de soluto.

-100g-16,67= 83,33g de disolvente.

2. Preparar solución acuosa de sacarosa 9,24%:

-Pesar 9,24g de sacarosa y disolver en 100ml de agua destilada.

3.Rotular tres tubos:

-1º: SF; Suero fisiológico.

-2º: SC: Sangre control.

-3º: SP: Sangre problema.

4. Rellenarlos según estas indicaciones:

5. Agitar suavemente los tubos y dejar reposar a temperatura ambiente durante 30 minutos.

6. Centrifugar los tubos a 2000rpm durante 5 minutos.

7. Rotular tres tubos:
-4º: TB; Tubo blanco.
-5º: TPr; Tubo patrón.
-6º: TPa; Tubo problema.

8. Rellenarlos según la tabla:

9. Medir la absorbancia de estos tubos en el espectrofotómetro.

Lectura de los resultados:

El resultado de las absorbancias:

-TB: ABS=0 (blanco)

-TPr: ABS= -0,052

-TPa: ABS= -0,00

Estos son los resultados de una sangre que sabemos que no tiene HPN y por eso nos dan negativos.

Aun así se puede calcular el % de hemólisis:

% de hemolisis=A(absorbancia del líquido presente en el tubo problema)/Am(absorbancia del líquido contenido en el tubo patrón (A máxima) x 100