Determinación de la sideremia.
Introducción:
-El hierro en sangre va unido a la transferrina y es liberado por la acción del ácido ascórbico, así que El hierro férrico queda reducido a ferroso por la hidroxilamina y después este reacciona con el FerroZine para producir un complejo coloreado, esta intensidad coloreada se mide espectrofotométricamente.
Material:
-Espentrofotómetro.
-Cuatro tubos de ensayo.
-Rotulador permanente.
-Micropipetas.
-Puntas de micropipeta.
-Cinco cubetas de espectrofotometría.
-Baño maría.
-Papel y lápiz.
Muestra:
-Suero o plasma heparizado.
Reactivos:
-R1: Tampón Acetato pH 4,9.
-R2: Reductor Ácido ascórbico.
-R3: Color FerroZine.
-Iron cal: Patrón primario acuoso de Hierro.
-Agua destilada.
Fundamento:
-En esta práctica calcularemos la concentración de sideremia a partir de su absorbancia realizando una fórmula.
Procedimiento:
1. Identificar cada tubo de ensayo con su contenido:
-1º Tubo de ensayo: RT (Reactivo de trabajo o blanco.
-2º Tubo de ensayo: Patrón.
-3º Tubo de ensayo: Blanco muestra.
-4º Tubo de ensayo: Muestra.
2. Preparar la muestra, centrifugar sangre periférica a 3500 rpm durante 10 minutos.
3. Vertir en cada tubo de ensayo:
-1º Tubo: 1ml de RT + 1 gota de R3 + 200microlitros de agua destilada.
-2º Tubo: 1ml de RT + 1 gota de R3 + 200microlitros de patrón.
-3º Tubo: 1ml de RT + 200microlitros de muestra.
-4º Tubo: 1ml de RT + 1 Gota de R3 + 200microlitros de muestra.
4.Incubar a 37ºC durante cinco minutos o a temperatura ambiente durante diez minutos.
5. Calcular las absorbancias.
Interpretación de los resultados:
-ABS patrón: 0.105.
-ABS Blanco muestra: 1.577.
-ABS Muestra: 1.581.
microgramos/dL de hierro= [(ABS muestra-ABS blanco muestra)/ABS patrón]x Concentración patrón(100)
Microgramos/dL de hierro= (1.581-1.577)/0.105x100= 3.809524 microgramos/dL de hierro.
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